以下是ELISA樣本制備的關鍵步驟及注意事項，綜合實驗規范與常見問題：
 

　　一、樣本類型處理要點‌
 

　　血清制備‌
 

　　采集后室溫靜置1小時，4℃ 2500rpm離心10分鐘取上清
 

　　避免溶血(血紅素干擾HRP顯色)和細菌污染(內源性酶致假陽性)
 

　　血漿處理‌
 

　　使用EDTA抗凝管采集，30分鐘內4℃離心分離
 

　　肝素抗凝劑可能干擾檢測，需參照試劑盒要求選擇
 

　　細胞培養上清‌
 

　　1500rpm離心10分鐘去除細胞碎片，分裝后-80℃保存
 

　　尿液/腦脊液‌
 

　　10000×g離心2分鐘，去除沉淀物后檢測
 

　　二、保存與凍存規范‌
 

　　樣本類型‌ ‌短期保存‌ ‌長期保存‌ ‌禁忌‌
 

　　血清/血漿 2-8℃ 48小時 -80℃(6個月) 反復凍融>3次
 

　　細胞上清 4℃ 24小時 -80℃(分裝) 室溫放置>30分鐘
 

　　三、關鍵注意事項‌
 

　　防污染措施‌
 

　　使用無菌離心管，操作全程在冰上進行(除凝血步驟)
 

　　細菌污染樣本需離心后取上清重新檢測
 

　　離心參數控制‌
 

　　血清/血漿：2500-3000rpm，10分鐘
 

　　細胞裂解物：12000-13000rpm，5-10分鐘
 

　　特殊樣本處理‌
 

　　高脂血樣本需超速離心(10000×g 15分鐘)
 

　　組織樣本需液氮速凍后研磨，避免蛋白降解
 

　　四、常見問題解決方案‌
 

　　假陽性高‌：檢查溶血/脂血情況，更換抗凝劑類型
 

　　重復性差‌：確保分裝凍存，避免凍融循環
 

　　濃度異常‌：預實驗確定樣本稀釋倍數(建議1:5-1:10)
 

　　通過規范操作可顯著提升檢測準確性。
 

　　注：以上資料僅供參考，不同品牌產品可能存在設計差異，操作前建議參考說明書‌。
 

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