有哪些方法可以提高ELISA實驗的重復性?
以下是提高ELISA實驗重復性的關鍵方法,天正信達結合操作優化和質控要點:
一、標準化操作流程
移液一致性
使用校準后的多通道移液器,采用吸頭預潤濕技術減少氣泡,確保加樣體積和速度一致。
洗板控制
優先使用洗板機保證每孔洗滌均勻,手工洗板時需控制力度和時間,避免孔間污染。
孵育條件
覆蓋板蓋減少邊緣效應,確保孵育溫度和時間嚴格統一(如37℃±0.5℃)。
二、試劑與樣本處理
試劑平衡與保存
所有試劑使用前需平衡至室溫,避免反復凍融,不同批次試劑不可混用。
樣本制備
避免溶血或高脂樣本,凍融樣本需充分混勻,渾濁樣本需離心后檢測。
三、質控與驗證
復孔檢測
設置復孔計算平均值,批內CV應<10%,批間CV<15%。
對照設置
每板需包含陰陽性對照及標準曲線(R²≥0.99),異常值需排查操作誤差。
四、環境與設備管理
溫控校準
維持環境溫度18-25℃,定期校準水浴箱和酶標儀。
避免干擾
顯色時避光操作,封板膜不可重復使用,邊緣孔可增加空白孔緩沖。
通過上述措施可顯著降低CV值,提升實驗精密度。
注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒
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