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ELISA實驗“避坑”手冊:樣本處理中的關鍵細節

更新時間:2025-10-27  |  點擊率:554
  ELISA實驗“避坑”手冊:樣本處理中的關鍵細節
 
  ELISA實驗中樣本處理是影響結果準確性的關鍵環節,以下是常見樣本類型的處理要點及避坑指南:
 
  一、血清樣本處理
 
  靜置與離心‌:全血需室溫靜置2小時或4℃過夜使細胞沉降,隨后以2000g離心10分鐘獲取上清‌。
 
  避坑:未離心直接加樣會導致雜質干擾,離心后需避免吸到沉淀層。
 
  儲存條件‌:短期存放建議2-8℃(≤1周),長期保存需分裝后-20℃(1個月內)或-80℃(1個月以上)‌。
 
  二、血漿樣本處理
 
  抗凝與離心‌:采集后需立即加入抗凝劑(如EDTA),30分鐘內以1000g離心15分鐘‌。
 
  避坑:抗凝劑選擇不當(如肝素可能干擾檢測)或離心延遲會導致纖維蛋白原殘留。
 
  凍存注意‌:避免反復凍融,建議分裝后-80℃保存‌。
 
  三、組織樣本處理
 
  勻漿方法‌:取100mg組織,用PBS沖洗后研磨或超聲裂解,結合反復凍融(2次)破壞細胞膜‌。
 
  避坑:組織塊未充分勻漿會導致目標蛋白釋放不全,影響檢測靈敏度。
 
  離心參數‌:低溫離心(4℃)后取上清,避免脂質或細胞碎片干擾‌。
 
  四、通用注意事項
 
  樣本污染‌:操作需無菌,避免細菌或外源蛋白引入假陽性。
 
  稀釋優化‌:高濃度樣本需預實驗確定稀釋倍數,確保檢測值在標準曲線范圍內。
 
  凍融控制‌:反復凍融不超過3次,避免蛋白降解‌。
 
  通過規范樣本處理流程,可顯著減少假陽性/陰性結果,提升ELISA數據的可靠性‌。
 
  注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
 
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