大鼠白介素12(IL-12P70)ELISA試劑盒實驗說明書

　　一、試劑盒組成

　　預(yù)包被抗體的96孔板(進(jìn)口高親和力抗體)

　　重組凍干標(biāo)準(zhǔn)品(需按說明書復(fù)溶)

　　生物素化檢測抗體(避光保存)

　　鏈霉親和素-HRP復(fù)合物(ABC稀釋液配制)

　　TMB顯色液與終止液(含硫酸)

　　樣本稀釋液(含穩(wěn)定劑)

　　洗滌緩沖液(20×濃縮液)

　　二、檢測原理

　　采用雙抗體夾心法：

　　固相抗體捕獲樣本中的IL-12 p70

　　生物素化抗體結(jié)合目標(biāo)抗原

　　鏈霉親和素-HRP催化TMB顯色

　　450nm波長讀值(參考波長540/570nm)

　　三、操作流程

　　樣本處理

　　血清/血漿：避免溶血，4℃短期保存，-80℃長期保存

　　細(xì)胞上清：離心去除顆粒物，建議新鮮檢測

　　實驗步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(建議7點濃度)

　　每孔加樣100μL(標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/空白)

　　37℃孵育90分鐘

　　洗滌3次(每次拍干)

　　加檢測抗體(100μL/孔)，37℃孵育60分鐘

　　加ABC復(fù)合物(100μL/孔)，避光孵育30分鐘

　　顯色15分鐘(避光)，加終止液終止反應(yīng)

　　四、關(guān)鍵參數(shù)

　　項目參數(shù)

　　靈敏度7-14.2pg/mL(不同品牌差異)

　　檢測范圍15.6-1000pg/mL(線性區(qū)間)

　　重復(fù)性板內(nèi)/板間CV<10%

　　交叉反應(yīng)不與IL-6、G-CSF等混淆

　　五、注意事項

　　所有試劑使用前需平衡至室溫(25℃)

　　顯色反應(yīng)需嚴(yán)格控制時間(±30秒)

　　終止液含腐蝕性成分，需佩戴防護(hù)裝備

　　建議每次實驗建立新標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　異常值需復(fù)測(建議n=3)

　　六、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線

　　四參數(shù)邏輯回歸擬合

　　樣本濃度=擬合方程計算值×稀釋倍數(shù)

　　七、性能驗證

　　回收率測試：建議加標(biāo)回收率85%-115%

　　穩(wěn)定性評估：開封后試劑需2-8℃避光保存

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。