ELISA試劑盒操作流程中哪些步驟最關鍵?  天津天正信達  Elisa試劑盒

　　一、ELISA試劑盒操作流程及技術要點

　　加樣細節‌：

　　使用專用加樣器，避免氣泡產生，槍頭不可觸及孔壁。

　　不同試劑更換吸頭，防止交叉污染。

　　加樣量需準確，避免孔間不一致。

　　孵育控制‌：

　　嚴格按說明書溫度(通常37℃)和時間(如1小時)孵育，避免溫度波動。

　　孵育期間確保酶標板平放，避免液體溢出。

　　洗滌性‌：

　　洗滌液現用現配，每孔注滿洗滌液，浸泡時間一致(30-60秒)。

　　甩板時快速翻轉120-150度，避免殘留液體污染相鄰孔。

　　樣本處理‌：

　　避免溶血和反復凍融，分裝后-20℃或-70℃保存。

　　混勻時輕柔顛倒，避免劇烈振蕩。

　　試劑保存‌：

　　試劑盒4℃-8℃冷藏，避免冷凍;使用前室溫回溫40-60分鐘。

　　標準品分裝后-20℃保存，嚴禁反復凍融。

　　二、常見問題及預防措施

　　背景顏色深/非特異性染色‌：

　　原因：洗滌不充分、試劑污染、顯色時間過長。

　　措施：嚴格洗滌步驟，更換吸頭，控制顯色時間。

　　所有孔均無明顯顏色‌：

　　原因：試劑混淆、酶標物失活、遺漏步驟。

　　措施：核對試劑標簽，檢查有效期，按流程操作。

　　標準曲線不佳‌：

　　原因：標準品配制錯誤、儲存不當、稀釋過早。

　　措施：現配現用，避免室溫放置過久，按說明書稀釋。

　　重復性差‌：

　　原因：加樣不準、孔間污染、儀器問題。

　　措施：校準加樣器，避免交叉污染，定期維護儀器。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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